Cytométrie & Imagerie de masse - Equipements
Cytomètre de Masse HELIOS (Fluidigm)
Outil complémentaire des cytomètres en flux, le cytomètre de masse permet d'augmenter considérablement le nombre de paramètres analysables (> 40), en s'affranchissant des problèmes de recouvrement des spectres de fluorescence observés en cytométrie conventionnelle.
Cette technologie utilise des isotopes de métaux non radioactifs de la famille des lanthanides pour le marquage des échantillons. Ces isotopes absents des systèmes biologiques permettent de limiter considérablement le bruit de fond observé en fluorescence, notamment lié à l'auto-fluorescence cellulaire.
La cytométrie de masse permet d'améliorer les capacités d'identification de cellules rares. Elle combine l’étude approfondie de marqueurs de surface et de voies de signalisation intracellulaires.
Imageur par Cytométrie de Masse HYPERION (Fluidigm)
Alliant la cytométrie de masse et une capacité d'imagerie, le système HyperionTM permet la visualisation simultanée de 4 à 37 marqueurs (phénotypes cellulaires complexes et des états fonctionnels) sur une même coupe histologique en résolution subcellulaire dans le contexte spatial du microenvironnement tissulaire.
Les échantillons analysables sont des coupes de tissus frais, congelés ou fixés, ainsi que des préparations cytologiques telles que des frottis cellulaires, marqués avec des anticorps couplés à des isotopes de métaux lourds. L'imagerie est réalisée par déplétion de zones tissulaires de très faible surface (1 mm²).
Cette technologie est particulièrement pertinente dans les cas où les tissus sont relativement rares ou précieux, comme les échantillons de patients.
Toutes les images brutes nécessitent d'être traitées au moyen d'algorithmes associant parfois l'intelligence artificielle.
Cytomètre en flux CYTOFLEX (Beckman Coulter)
Analyseur en flux équipé de 4 lasers émettant respectivement à 405 nm ,488 nm, 561 nm et 640 nm. Analyse simultanée de 15 paramètres dont 13 de fluorescence et 2 de morphologie (taille relative et structure). Calcul automatique des compensations de fluorescence lors des changements de gain en cours d’acquisition. Comptage des concentrations cellulaires en valeur absolue. L'instrument est doté d'un passeur automatique de plaque 96 puits. Pilotage de l’instrument via le logiciel CytExpert sur PC.
Cytomètre en flux LSR FORTESSA II- UV (BD Biosciences)
Analyseur en flux équipé de 5 lasers émettant respectivement à 355, 405, 488, 561 et 640 nm. Analyse simultanée de 20 paramètres dont 18 paramètres de fluorescence, 2 de morphologie (taille relative et granulosité) et le pulse « width » pour la distinction des agrégats. Compensation de fluorescence pendant et après acquisition. L'instrument est doté d'un passeur automatique de plaque 96 puits. Pilotage de l’instrument via le logiciel FACSDiVa™, sur station PC.
Cytomètre en flux Spectral AURORA (Cytek)
Analyseur en flux spectral équipé de 5 lasers émettant respectivement à 355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm et 640 nm. L’instrument possède 64 canaux de détection (APD) pour la fluorescence et 3 canaux pour les paramètres morphologiques (FSC et SSC sur laser 488nm, et SSC sur laser 405nm). Il permet l'analyse d'échantillons marqués avec des fluorochomes émettant entre 365 et 829 nm. Pilotage de l’instrument via le logiciel SpectroFlo sur PC.
Trieur de cellules ARIA-FUSION - UV (BD Biosciences) - 2 instruments identiques
Analyseur trieur haute vitesse équipé de 5 lasers émettant respectivement à 355, 405, 488, 561 et 640 nm: permet l’excitation de la majorité des fluorochromes dans les gammes de longueur d’ondes de l’UV au rouge lointain. Analyse simultanée de 20 paramètres, dont 18 paramètres de fluorescence, 2 de morphologie (taille et granulosité) et le pulse « width » pour la distinction des agrégats. Nombre de voies de tri : 4 voies en tubes 1.5 ou 5 mL - 2 voies en tubes 15mL - 1 voie en plaques 6, 24, 48, 96 ou 384 puits. 3 modes de tri : Purity, Yield ou Single cell (+ index sorting) Thermostatisation de l’échantillon à trier 4°, 22°, 37° et 42°C et des fractions triées De -4°C à +42°C. Les diamètres des buses disponibles sont de 70 μm, 85 μm, et 100 μm. L’acquisition des données est effectuée via le logiciel DIVA.
Trieur de cellules INFLUX- UV 5 Lasers (BD Biosciences)
Analyseur trieur haute vitesse équipé de 5 lasers émettant respectivement à 355, 405, 488, 561 et 640 nm : permet l’excitation de la majorité des fluorochromes (de l'UV au rouge lointain).
Equipé d’un tri 6 voies, il effectue également le tri cellulaire en plaques multi-puits ou encore sur lames. Analyse simultanée de 21 paramètres, dont 19 paramètres de fluorescence, 2 de morphologie (taille et granulosité) et le pulse « width » pour la distinction des agrégats. Les diamètres des buses disponibles sont de 70 μm, 86 µm, 100 μm et 140 μm. L’acquisition des données est effectuée via le logiciel SORTWARE™.
